硫酸奎宁荧光探针用于水中苦味酸的测定
１ 试验部分
１．１ 仪器与试剂
日立 Ｆ２７００型荧光分光光度计；ＦＡ１００４Ｎ 型
电子分析天平；岛津２５５０型紫外可见分光光度计ＰＨＳ３Ｅ型酸度计；ＷＦＨ２０４Ｂ型手提紫外灯。
苦味酸标准储备溶液：８０．０μｍｏｌ·Ｌ－１。
硫酸奎宁溶液：４．００×１０－６
ｍｏｌ·Ｌ－１。
磷酸盐缓冲溶液（ＰＢＳ）：由０．２０ｍｏｌ·Ｌ－１磷酸
二氢钠溶液和 ０．２０ ｍｏｌ·Ｌ－１ 磷酸氢二钠溶液组
成，ｐＨ 为６．６。
所用试剂均为分析纯，试验用水为二次蒸馏水。
１．２ 试验方法
在５ｍＬ离心管中依次加入４．００×１０－６
ｍｏｌ·
Ｌ－１硫酸奎宁溶液４００μＬ，ｐＨ６．６磷酸盐缓冲溶液
１ｍＬ和不同质量浓度的苦味酸标准溶液，最后用水
稀释至４ｍＬ，混匀后，避光静置１ｍｉｎ。选择荧光分
光光度计，光谱通带宽度为１０ｎｍ，光电倍增管电压
为４００Ｖ 和室温条件，于硫酸奎宁的最大激发波长
３３０ｎｍ 和最大发射波长３８５ｎｍ 处测量其荧光强度
犐。同时测量试剂空白的荧光强度
犐０，计算苦味酸
对硫酸奎宁体系荧光的猝灭效率（
犐０ －
犐）／
犐０，并通
过猝灭率与苦味酸的线性关系进行定量分析。
２ 结果与讨论
２．１ 荧光光谱表征
在ｐＨ ６．６ 的 磷 酸 盐 缓 冲 溶 液，激 发 波 长
３３０ｎｍ 条件 下，试 验 考 察 了 苦 味 酸 在 波 长 ２００～
６００ｎｍ 范围内的紫外吸收光谱和苦味酸对硫酸奎
宁光谱的影响，结果见图１。
由 图 １ 可 知：苦 味 酸 的 最 大 吸 收 波 长 为
３５０ｎｍ。在激发波长３３０ｎｍ 的条件下，硫酸奎宁的
最大荧光发射波长为３８５ｎｍ；当加入苦味酸后，硫
酸奎宁在３８５ｎｍ 处的荧光被明显猝灭。基于加入
苦味酸前后硫酸奎宁体系荧光强度的变化，将硫酸
奎宁作为荧光探针实现苦味酸的测定。
２．２．１ 磷酸盐缓冲溶液的酸度
采用０．２０ｍｏｌ·Ｌ－１磷酸盐缓冲溶液，考察了
ｐＨ 分别为４．４，５．８，６．６，７．０，７．４，８．０，９．３时对苦
味酸测定的影响，以硫酸奎宁在３８５ｎｍ 处的荧光
强度作为依据进行比较。结果表明：空白溶液的荧
光强度和样品溶液的荧光强度波动较大，说明溶液
酸度对测定苦味酸有一定的影响；对荧光猝灭效率
（犐０－
犐）／
犐０ 而言，走势平稳，波动较小，在 ｐＨ６．６
时，荧光猝灭效率（
犐０ －
犐）／
犐０ 最大。故试验选择磷
酸盐缓冲溶液的酸度为ｐＨ６．６。
２．２．２ 反应时间
在ｐＨ６．６的磷酸盐缓冲溶液中，试验考察了
反应时间分别为０，１，２，５，１０，２０，４０，６０ｍｉｎ时对体
系荧光强度及荧光猝灭效率的影响。结果表明：在
６０ｍｉｎ内，空白溶液和样品溶液的荧光强度变化很
小，基本不受反应时间的影响，说明苦味酸对硫酸奎
宁荧光的猝灭过程非常快。荧光猝灭效率（
犐０ －
犐）／
犐０ 在１ｍｉｎ之内达到最大，故试验选择反应时间为
１ｍｉｎ。
２．３ 干扰性试验
按试验方法对与苦味酸有相似结构的有机物和
常见干扰离子进行了选择性测定，结果见图２。
由图２可知：这些物质对硫酸奎宁的荧光猝灭
效率（犐０－
犐）／
犐０ 都很小，说明其他物质对硫酸奎宁
体系的荧光强度并不产生影响。当加入苦味酸样品
后，荧光强度显著降低，荧光猝灭效率（
犐０－
犐）／
犐０ 显
著增大，说明方法具有很好的选择性和专一性。
试验考察了共存物质对测定苦味酸可能产生的
的 ＣＯ３
２－ 、ＰＯ４
２－ 、ＳＯ４
２－ ，４０ 倍 的 Ａｇ＋ 、Ｃｄ２＋ 、
Ｐｂ２＋ ，２０ 倍 的 苯 酚、硝 基 苯 （ＮＢ）、二 硝 基 甲 苯
（ＤＮＴ）、三硝基甲苯（ＴＮＴ）对测定苦味酸不产生
干扰。
２．４ 标准曲线及检出限
配制 ０，０．４０，１．００，２．００，４．００，８．００，２０．０，
４０．０，８０．０μｍｏｌ·Ｌ－１的苦味酸标准溶液，分别与
硫酸奎宁作用后，按试验方法测定荧光强度，得到的
荧光光谱见图３。以苦味酸标准溶液的浓度为横坐
标，对应的荧光强度猝灭率（ｌｇ
犐０／
犐）为纵坐标绘制
标准曲线。
Ｌ－１范围内与荧光强度猝灭率呈线性关系，线性回
归方程为ｌｇ
犐０／
犐＝０．００６６＋０．０１１３
犮，相关系数为
０．９９９１。平行测定１１次空白溶液，按３倍的标准
偏差计算检出限，方法的检出限（３
狊）为８８ｎｍｏｌ·
Ｌ－１。邓 祥等：硫酸奎宁荧光探针用于水中苦味酸的测定
２．５ 样品分析
采集某印染厂、炼焦厂和河水的水样，经过滤去
除杂质后，按试验方法测定其中苦味酸的含量，同时
进行加标回收试验，结果见表 １，其中 “－”表示未
检出。
用，构建了基于硫酸奎宁的苦味酸荧光探针。方法
具有很好的选择性和专一性，准确度高，符合分析要
求，可用于生活和工业污水中苦味酸含量的测定
１．１ 仪器与试剂
日立 Ｆ２７００型荧光分光光度计；ＦＡ１００４Ｎ 型
电子分析天平；岛津２５５０型紫外可见分光光度计ＰＨＳ３Ｅ型酸度计；ＷＦＨ２０４Ｂ型手提紫外灯。
苦味酸标准储备溶液：８０．０μｍｏｌ·Ｌ－１。
硫酸奎宁溶液：４．００×１０－６
ｍｏｌ·Ｌ－１。
磷酸盐缓冲溶液（ＰＢＳ）：由０．２０ｍｏｌ·Ｌ－１磷酸
二氢钠溶液和 ０．２０ ｍｏｌ·Ｌ－１ 磷酸氢二钠溶液组
成，ｐＨ 为６．６。
所用试剂均为分析纯，试验用水为二次蒸馏水。
１．２ 试验方法
在５ｍＬ离心管中依次加入４．００×１０－６
ｍｏｌ·
Ｌ－１硫酸奎宁溶液４００μＬ，ｐＨ６．６磷酸盐缓冲溶液
１ｍＬ和不同质量浓度的苦味酸标准溶液，最后用水
稀释至４ｍＬ，混匀后，避光静置１ｍｉｎ。选择荧光分
光光度计，光谱通带宽度为１０ｎｍ，光电倍增管电压
为４００Ｖ 和室温条件，于硫酸奎宁的最大激发波长
３３０ｎｍ 和最大发射波长３８５ｎｍ 处测量其荧光强度
犐。同时测量试剂空白的荧光强度
犐０，计算苦味酸
对硫酸奎宁体系荧光的猝灭效率（
犐０ －
犐）／
犐０，并通
过猝灭率与苦味酸的线性关系进行定量分析。
２ 结果与讨论
２．１ 荧光光谱表征
在ｐＨ ６．６ 的 磷 酸 盐 缓 冲 溶 液，激 发 波 长
３３０ｎｍ 条件 下，试 验 考 察 了 苦 味 酸 在 波 长 ２００～
６００ｎｍ 范围内的紫外吸收光谱和苦味酸对硫酸奎
宁光谱的影响，结果见图１。
由 图 １ 可 知：苦 味 酸 的 最 大 吸 收 波 长 为
３５０ｎｍ。在激发波长３３０ｎｍ 的条件下，硫酸奎宁的
最大荧光发射波长为３８５ｎｍ；当加入苦味酸后，硫
酸奎宁在３８５ｎｍ 处的荧光被明显猝灭。基于加入
苦味酸前后硫酸奎宁体系荧光强度的变化，将硫酸
奎宁作为荧光探针实现苦味酸的测定。
２．２．１ 磷酸盐缓冲溶液的酸度
采用０．２０ｍｏｌ·Ｌ－１磷酸盐缓冲溶液，考察了
ｐＨ 分别为４．４，５．８，６．６，７．０，７．４，８．０，９．３时对苦
味酸测定的影响，以硫酸奎宁在３８５ｎｍ 处的荧光
强度作为依据进行比较。结果表明：空白溶液的荧
光强度和样品溶液的荧光强度波动较大，说明溶液
酸度对测定苦味酸有一定的影响；对荧光猝灭效率
（犐０－
犐）／
犐０ 而言，走势平稳，波动较小，在 ｐＨ６．６
时，荧光猝灭效率（
犐０ －
犐）／
犐０ 最大。故试验选择磷
酸盐缓冲溶液的酸度为ｐＨ６．６。
２．２．２ 反应时间
在ｐＨ６．６的磷酸盐缓冲溶液中，试验考察了
反应时间分别为０，１，２，５，１０，２０，４０，６０ｍｉｎ时对体
系荧光强度及荧光猝灭效率的影响。结果表明：在
６０ｍｉｎ内，空白溶液和样品溶液的荧光强度变化很
小，基本不受反应时间的影响，说明苦味酸对硫酸奎
宁荧光的猝灭过程非常快。荧光猝灭效率（
犐０ －
犐）／
犐０ 在１ｍｉｎ之内达到最大，故试验选择反应时间为
１ｍｉｎ。
２．３ 干扰性试验
按试验方法对与苦味酸有相似结构的有机物和
常见干扰离子进行了选择性测定，结果见图２。
由图２可知：这些物质对硫酸奎宁的荧光猝灭
效率（犐０－
犐）／
犐０ 都很小，说明其他物质对硫酸奎宁
体系的荧光强度并不产生影响。当加入苦味酸样品
后，荧光强度显著降低，荧光猝灭效率（
犐０－
犐）／
犐０ 显
著增大，说明方法具有很好的选择性和专一性。
试验考察了共存物质对测定苦味酸可能产生的
的 ＣＯ３
２－ 、ＰＯ４
２－ 、ＳＯ４
２－ ，４０ 倍 的 Ａｇ＋ 、Ｃｄ２＋ 、
Ｐｂ２＋ ，２０ 倍 的 苯 酚、硝 基 苯 （ＮＢ）、二 硝 基 甲 苯
（ＤＮＴ）、三硝基甲苯（ＴＮＴ）对测定苦味酸不产生
干扰。
２．４ 标准曲线及检出限
配制 ０，０．４０，１．００，２．００，４．００，８．００，２０．０，
４０．０，８０．０μｍｏｌ·Ｌ－１的苦味酸标准溶液，分别与
硫酸奎宁作用后，按试验方法测定荧光强度，得到的
荧光光谱见图３。以苦味酸标准溶液的浓度为横坐
标，对应的荧光强度猝灭率（ｌｇ
犐０／
犐）为纵坐标绘制
标准曲线。
Ｌ－１范围内与荧光强度猝灭率呈线性关系，线性回
归方程为ｌｇ
犐０／
犐＝０．００６６＋０．０１１３
犮，相关系数为
０．９９９１。平行测定１１次空白溶液，按３倍的标准
偏差计算检出限，方法的检出限（３
狊）为８８ｎｍｏｌ·
Ｌ－１。邓 祥等：硫酸奎宁荧光探针用于水中苦味酸的测定
２．５ 样品分析
采集某印染厂、炼焦厂和河水的水样，经过滤去
除杂质后，按试验方法测定其中苦味酸的含量，同时
进行加标回收试验，结果见表 １，其中 “－”表示未
检出。
用，构建了基于硫酸奎宁的苦味酸荧光探针。方法
具有很好的选择性和专一性，准确度高，符合分析要
求，可用于生活和工业污水中苦味酸含量的测定
