三元量子点荧光探针测定新霉素
１ 试验部分
１．１ 仪器与试剂
日立 Ｆ４５００ 型 荧 光 分 光 光 度 计，日 立 ＵＶ
３０１０型紫外可 见 分 光 光 度 计，ＰＢ１０ 型 精 密 酸 度
计，ＳＺＣＬ２型智能控温磁力搅拌器，ＷＧ９０２０Ａ 型
卧式电热鼓风干燥箱，Ｈ１６５０Ｒ 型台式高速冷冻离
心机，５０ｍＬ聚四氟乙烯反应釜。
新霉素标准储备溶液：１．０×１０－５
ｍｏｌ·Ｌ－１，称
取新霉素０．００７１２ｇ于２５０ｍＬ 烧杯中，加少量水
溶解后，移至１Ｌ 容量瓶中，用水定容，置于冰箱中
冷藏保存。
氯化铜、三氯化铟、硫脲、氢氧化钠、巯基乙酸、
新霉素均为分析纯；试验用水为二次蒸馏水。
１．２ 试验方法
１．２．１ ＣｕＩｎＳ２ 量子点制备
将氯化铜０．４０９ｇ和三氯化铟０．５３１ｇ溶于水
中，然后加入巯基乙酸２．５ｍＬ，磁力搅拌２０ｍｉｎ。
用１．０ｍｏｌ·Ｌ－１氢氧化钠溶液调节ｐＨ 至１１．０，加
入硫脲０．３６５ｇ，磁力搅拌至完全溶解后转入反应釜
中，在１５０°C干燥箱中反应２１ｈ，待冷却至室温后取
出。加入乙醇使ＣｕＩｎＳ２ 量子点沉降，离心后将沉淀
溶于水中，置于４ °C冰箱中保存备用。１．２．２ 样品前处理
将在市场购买的新鲜小白菜用捣碎机捣碎，混
合均匀后，置于冰柜中保存备用。
称取小白菜试样５．０００ｇ置于１００ｍＬ 锥形瓶
中，加 入 甲 醇 ５０ ｍＬ，超 声 提 取 １０ ｍｉｎ，以
１２０００ｒ·ｍｉｎ－１ 转 速 离 心 １０ ｍｉｎ，取 上 清 液 于
５０ｍＬ鸡心瓶中，减压浓缩至１０ｍＬ，转入５０ｍＬ容
量瓶中，加水定容，置于冰箱中冷藏备用。
１．２．３ 新霉素测定
在一系列５ｍＬ比色管中，依次加入 ＣｕＩｎＳ２ 量
子点０．５ ｍＬ、ｐＨ８．０ 的三羟甲基氨基甲烷盐酸
（ＴｒｉｓＨＣｌ）缓冲溶液０．５ｍＬ和一定量的新霉素标
准溶液，用水稀释至刻度，摇匀。室温下静置５ｍｉｎ
后，以激发波长３５０ｎｍ 测定体系的荧光强度（
犐ｆ）和
空白溶 液 （未 加 入 新 霉 素 标 准 溶 液）的 荧 光 强 度
（
犐０），计算体系荧光猝灭强度（Δ
犐＝
犐０－
犐ｆ）。２ 结果与讨论
２．１ 犆狌犐狀犛２ 量子点的形貌表征
巯基乙酸修饰 ＣｕＩｎＳ２ 量子点的透射电子显微
镜（ＴＥＭ）图见图１。
散性较好，平均粒径约为３．８ｎｍ。
２．２ 犆狌犐狀犛２ 量子点和新霉素作用的荧光光谱
巯基乙酸修饰 ＣｕＩｎＳ２ 量子点的紫外可见吸收
光谱和荧光发射光谱见图２。
由图２可知：ＣｕＩｎＳ２ 量子点的紫外可见吸收
峰位于波长６００ｎｍ 处；当激发波长为３５０ｎｍ 时，
ＣｕＩｎＳ２ 量子点的荧光发射峰位于５４０ｎｍ 处，荧光
发射峰窄而对称，表明ＣｕＩｎＳ２ 量子点具有较好的荧
光性能。
在ＣｕＩｎＳ２ 量子点中加入系列新霉素标准溶液，
量子点荧光强度发生了显著的降低，且随着新霉素在加入量的增加，荧光发射峰也略有红移（见图３），据
此建立了一种测定新霉素含量的荧光猝灭法
ＴｒｉｓＨＣｌ缓冲溶液中 Δ
犐 最大且稳定。同时，考
察了 ＴｒｉｓＨＣｌ缓冲溶液的酸度对Δ
犐的影响。结果
表明：随 ｐＨ 的 增 加，Δ
犐 逐 渐 增 强；当 ｐＨ 为 ８．０
时，Δ
犐达到最大值；此后随ｐＨ 增加，Δ
犐 逐渐降低。
试验进一步考察了 ＴｒｉｓＨＣｌ缓冲溶液用量对Δ
犐的
影响。结果表明：随 ＴｒｉｓＨＣｌ缓 冲 溶 液 用 量 的 增
加，Δ
犐逐渐增大；当缓冲溶液用量为０．５ｍＬ时，Δ
犐
达到最大值；继续增加缓冲溶液用量，Δ
犐反而减小。
试验 选 择 加 入 ｐＨ ８．０ 的 ＴｒｉｓＨＣｌ 缓 冲 溶 液
０．５ｍＬ。
２．３．２ 量子点的浓度
试验考察了 ＣｕＩｎＳ２ 量子点浓度对体系荧光猝
灭强度的影响，其结果见图４
２．３．１ 缓冲溶液的酸度及用量
试验考察了 ＴｒｉｓＨＣｌ、ＢＲ、乙酸乙酸钠等缓冲
溶液对体系荧光猝灭强度 Δ
犐 的影响。结果表明在 ＴｒｉｓＨＣｌ缓冲溶液中 Δ
犐 最大且稳定。同时，考
察了 ＴｒｉｓＨＣｌ缓冲溶液的酸度对Δ
犐的影响。结果
表明：随 ｐＨ 的 增 加，Δ
犐 逐 渐 增 强；当 ｐＨ 为 ８．０
时，Δ
犐达到最大值；此后随ｐＨ 增加，Δ
犐 逐渐降低。
试验进一步考察了 ＴｒｉｓＨＣｌ缓冲溶液用量对Δ
犐的
影响。结果表明：随 ＴｒｉｓＨＣｌ缓 冲 溶 液 用 量 的 增
加，Δ
犐逐渐增大；当缓冲溶液用量为０．５ｍＬ时，Δ
犐
达到最大值；继续增加缓冲溶液用量，Δ
犐反而减小。
试验 选 择 加 入 ｐＨ ８．０ 的 ＴｒｉｓＨＣｌ 缓 冲 溶 液
０．５ｍＬ。
２．３．２ 量子点的浓度
试验考察了 ＣｕＩｎＳ２ 量子点浓度对体系荧光猝
灭强度的影响，其结果见图４在 ＴｒｉｓＨＣｌ缓冲溶液中 Δ
犐 最大且稳定。同时，考
察了 ＴｒｉｓＨＣｌ缓冲溶液的酸度对Δ
犐的影响。结果
表明：随 ｐＨ 的 增 加，Δ
犐 逐 渐 增 强；当 ｐＨ 为 ８．０
时，Δ
犐达到最大值；此后随ｐＨ 增加，Δ
犐 逐渐降低。
试验进一步考察了 ＴｒｉｓＨＣｌ缓冲溶液用量对Δ
犐的
影响。结果表明：随 ＴｒｉｓＨＣｌ缓 冲 溶 液 用 量 的 增
加，Δ
犐逐渐增大；当缓冲溶液用量为０．５ｍＬ时，Δ
犐
达到最大值；继续增加缓冲溶液用量，Δ
犐反而减小。
试验 选 择 加 入 ｐＨ ８．０ 的 ＴｒｉｓＨＣｌ 缓 冲 溶 液
０．５ｍＬ。
２．３．２ 量子点的浓度
试验考察了 ＣｕＩｎＳ２ 量子点浓度对体系荧光猝
灭强度的影响，其结果见图４２．５ 标准曲线与检出限
按试验方法对新霉素标准溶液系列进行测定，
并绘制标准曲线。结果表明：新霉素的浓度在１．０×
１０－８～２．０×１０－７
ｍｏｌ·Ｌ－１内与其对应的 Δ
犐 呈线
性关系，其线性回归方程为
狔＝３．７４７
狓＋０．５１３３，
相关系数为０．９９９３。以空白的３倍标准偏差除以
标准曲线的斜率计算方法的检出限（３
狊／
犽）为２．０×
１０－１０
ｍｏｌ·Ｌ－１。
２．６ 样品分析
按试验方法处理并测定小白菜，样品中未检出
新霉素，表明样品中无新霉素或其含量低于检出限。
在样品提取液中加入不同浓度水平的新霉素标准溶
液，进行加标回收试验，精密度和回收试验结果见
表１
间，相对标准偏差（ＲＳＤ）在１．９％～２．４％之间。
本工作建立了测定新霉素含量的荧光猝灭法。
该方法操作简单、线性范围宽、灵敏度高、检测成本
低，可用于果蔬中新霉素残留量的快速分析检测。
１．１ 仪器与试剂
日立 Ｆ４５００ 型 荧 光 分 光 光 度 计，日 立 ＵＶ
３０１０型紫外可 见 分 光 光 度 计，ＰＢ１０ 型 精 密 酸 度
计，ＳＺＣＬ２型智能控温磁力搅拌器，ＷＧ９０２０Ａ 型
卧式电热鼓风干燥箱，Ｈ１６５０Ｒ 型台式高速冷冻离
心机，５０ｍＬ聚四氟乙烯反应釜。
新霉素标准储备溶液：１．０×１０－５
ｍｏｌ·Ｌ－１，称
取新霉素０．００７１２ｇ于２５０ｍＬ 烧杯中，加少量水
溶解后，移至１Ｌ 容量瓶中，用水定容，置于冰箱中
冷藏保存。
氯化铜、三氯化铟、硫脲、氢氧化钠、巯基乙酸、
新霉素均为分析纯；试验用水为二次蒸馏水。
１．２ 试验方法
１．２．１ ＣｕＩｎＳ２ 量子点制备
将氯化铜０．４０９ｇ和三氯化铟０．５３１ｇ溶于水
中，然后加入巯基乙酸２．５ｍＬ，磁力搅拌２０ｍｉｎ。
用１．０ｍｏｌ·Ｌ－１氢氧化钠溶液调节ｐＨ 至１１．０，加
入硫脲０．３６５ｇ，磁力搅拌至完全溶解后转入反应釜
中，在１５０°C干燥箱中反应２１ｈ，待冷却至室温后取
出。加入乙醇使ＣｕＩｎＳ２ 量子点沉降，离心后将沉淀
溶于水中，置于４ °C冰箱中保存备用。１．２．２ 样品前处理
将在市场购买的新鲜小白菜用捣碎机捣碎，混
合均匀后，置于冰柜中保存备用。
称取小白菜试样５．０００ｇ置于１００ｍＬ 锥形瓶
中，加 入 甲 醇 ５０ ｍＬ，超 声 提 取 １０ ｍｉｎ，以
１２０００ｒ·ｍｉｎ－１ 转 速 离 心 １０ ｍｉｎ，取 上 清 液 于
５０ｍＬ鸡心瓶中，减压浓缩至１０ｍＬ，转入５０ｍＬ容
量瓶中，加水定容，置于冰箱中冷藏备用。
１．２．３ 新霉素测定
在一系列５ｍＬ比色管中，依次加入 ＣｕＩｎＳ２ 量
子点０．５ ｍＬ、ｐＨ８．０ 的三羟甲基氨基甲烷盐酸
（ＴｒｉｓＨＣｌ）缓冲溶液０．５ｍＬ和一定量的新霉素标
准溶液，用水稀释至刻度，摇匀。室温下静置５ｍｉｎ
后，以激发波长３５０ｎｍ 测定体系的荧光强度（
犐ｆ）和
空白溶 液 （未 加 入 新 霉 素 标 准 溶 液）的 荧 光 强 度
（
犐０），计算体系荧光猝灭强度（Δ
犐＝
犐０－
犐ｆ）。２ 结果与讨论
２．１ 犆狌犐狀犛２ 量子点的形貌表征
巯基乙酸修饰 ＣｕＩｎＳ２ 量子点的透射电子显微
镜（ＴＥＭ）图见图１。
散性较好，平均粒径约为３．８ｎｍ。
２．２ 犆狌犐狀犛２ 量子点和新霉素作用的荧光光谱
巯基乙酸修饰 ＣｕＩｎＳ２ 量子点的紫外可见吸收
光谱和荧光发射光谱见图２。
由图２可知：ＣｕＩｎＳ２ 量子点的紫外可见吸收
峰位于波长６００ｎｍ 处；当激发波长为３５０ｎｍ 时，
ＣｕＩｎＳ２ 量子点的荧光发射峰位于５４０ｎｍ 处，荧光
发射峰窄而对称，表明ＣｕＩｎＳ２ 量子点具有较好的荧
光性能。
在ＣｕＩｎＳ２ 量子点中加入系列新霉素标准溶液，
量子点荧光强度发生了显著的降低，且随着新霉素在加入量的增加，荧光发射峰也略有红移（见图３），据
此建立了一种测定新霉素含量的荧光猝灭法
ＴｒｉｓＨＣｌ缓冲溶液中 Δ犐 最大且稳定。同时，考
察了 ＴｒｉｓＨＣｌ缓冲溶液的酸度对Δ
犐的影响。结果
表明：随 ｐＨ 的 增 加，Δ
犐 逐 渐 增 强；当 ｐＨ 为 ８．０
时，Δ
犐达到最大值；此后随ｐＨ 增加，Δ
犐 逐渐降低。
试验进一步考察了 ＴｒｉｓＨＣｌ缓冲溶液用量对Δ
犐的
影响。结果表明：随 ＴｒｉｓＨＣｌ缓 冲 溶 液 用 量 的 增
加，Δ
犐逐渐增大；当缓冲溶液用量为０．５ｍＬ时，Δ
犐
达到最大值；继续增加缓冲溶液用量，Δ
犐反而减小。
试验 选 择 加 入 ｐＨ ８．０ 的 ＴｒｉｓＨＣｌ 缓 冲 溶 液
０．５ｍＬ。
２．３．２ 量子点的浓度
试验考察了 ＣｕＩｎＳ２ 量子点浓度对体系荧光猝
灭强度的影响，其结果见图４
２．３．１ 缓冲溶液的酸度及用量
试验考察了 ＴｒｉｓＨＣｌ、ＢＲ、乙酸乙酸钠等缓冲
溶液对体系荧光猝灭强度 Δ
犐 的影响。结果表明在 ＴｒｉｓＨＣｌ缓冲溶液中 Δ
犐 最大且稳定。同时，考
察了 ＴｒｉｓＨＣｌ缓冲溶液的酸度对Δ
犐的影响。结果
表明：随 ｐＨ 的 增 加，Δ
犐 逐 渐 增 强；当 ｐＨ 为 ８．０
时，Δ
犐达到最大值；此后随ｐＨ 增加，Δ
犐 逐渐降低。
试验进一步考察了 ＴｒｉｓＨＣｌ缓冲溶液用量对Δ
犐的
影响。结果表明：随 ＴｒｉｓＨＣｌ缓 冲 溶 液 用 量 的 增
加，Δ
犐逐渐增大；当缓冲溶液用量为０．５ｍＬ时，Δ
犐
达到最大值；继续增加缓冲溶液用量，Δ
犐反而减小。
试验 选 择 加 入 ｐＨ ８．０ 的 ＴｒｉｓＨＣｌ 缓 冲 溶 液
０．５ｍＬ。
２．３．２ 量子点的浓度
试验考察了 ＣｕＩｎＳ２ 量子点浓度对体系荧光猝
灭强度的影响，其结果见图４在 ＴｒｉｓＨＣｌ缓冲溶液中 Δ
犐 最大且稳定。同时，考
察了 ＴｒｉｓＨＣｌ缓冲溶液的酸度对Δ
犐的影响。结果
表明：随 ｐＨ 的 增 加，Δ
犐 逐 渐 增 强；当 ｐＨ 为 ８．０
时，Δ
犐达到最大值；此后随ｐＨ 增加，Δ
犐 逐渐降低。
试验进一步考察了 ＴｒｉｓＨＣｌ缓冲溶液用量对Δ
犐的
影响。结果表明：随 ＴｒｉｓＨＣｌ缓 冲 溶 液 用 量 的 增
加，Δ
犐逐渐增大；当缓冲溶液用量为０．５ｍＬ时，Δ
犐
达到最大值；继续增加缓冲溶液用量，Δ
犐反而减小。
试验 选 择 加 入 ｐＨ ８．０ 的 ＴｒｉｓＨＣｌ 缓 冲 溶 液
０．５ｍＬ。
２．３．２ 量子点的浓度
试验考察了 ＣｕＩｎＳ２ 量子点浓度对体系荧光猝
灭强度的影响，其结果见图４２．５ 标准曲线与检出限
按试验方法对新霉素标准溶液系列进行测定，
并绘制标准曲线。结果表明：新霉素的浓度在１．０×
１０－８～２．０×１０－７
ｍｏｌ·Ｌ－１内与其对应的 Δ
犐 呈线
性关系，其线性回归方程为
狔＝３．７４７
狓＋０．５１３３，
相关系数为０．９９９３。以空白的３倍标准偏差除以
标准曲线的斜率计算方法的检出限（３
狊／
犽）为２．０×
１０－１０
ｍｏｌ·Ｌ－１。
２．６ 样品分析
按试验方法处理并测定小白菜，样品中未检出
新霉素，表明样品中无新霉素或其含量低于检出限。
在样品提取液中加入不同浓度水平的新霉素标准溶
液，进行加标回收试验，精密度和回收试验结果见
表１
间，相对标准偏差（ＲＳＤ）在１．９％～２．４％之间。
本工作建立了测定新霉素含量的荧光猝灭法。
该方法操作简单、线性范围宽、灵敏度高、检测成本
低，可用于果蔬中新霉素残留量的快速分析检测。
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